„New Tech“ visiškai automatinė nukleorūgščių ekstrahavimo ir aptikimo mašina

Penkios jėgos:
● Prietaisas sukonfigūruotas su nukleino rūgščių ekstrahavimo ir gryninimo etapais
● Prietaisas sukonfigūruotas su ultragarso ištraukimo moduliu
● Prietaisas sukonfigūruotas visiškai automatiniu režimu
● Prietaisas su kintamos temperatūros stiprinimu
● Prietaisas sukonfigūruotas su visiškai uždarytu reagentų rinkiniu

1. Ar reikia ekstrahuoti ir išvalyti nukleorūgščių aptikimo reagentus?
Nukleino rūgščių aptikimo principas yra toks: veikiant pradmeniui, DNR polimerazė naudojama grandininei DNR/RNR amplifikacijai atlikti (reikalaujama atvirkštinės NA transkripcijos), o tada nustatomas išleisto fluorescencinio signalo kiekis. ar mėginyje yra aptinkamo patogeno nukleino rūgšties (DNR/RNR).

1) Mėginiuose, kurie nebuvo ekstrahuoti arba išgryninti, gali būti daug komponentų, turinčių įtakos galutiniam rezultatui: nukleazė (kuri gali ištirpinti tikslinę nukleino rūgštį ir sukelti klaidingai neigiamą), proteazės (kuri gali sumažinti DNR polimerazę ir sukelti klaidingai neigiamą), sunkiųjų metalų. druska (dėl kurios inaktyvuojama sintazė ir sukeliamas klaidingas teigiamas rezultatas), per rūgštus arba per šarminis PH (dėl to reakcija gali nepavykti), neužbaigta RNR (dėl klaidingai neigiamos atvirkštinės transkripcijos nesėkmės).

2) Kai kuriuos mėginius sunku tiesiogiai amplifikuoti: gramteigiamus ir kai kuriuos parazitus, dėl jų storų ląstelių sienelių ir kitų struktūrų, jei jie neatliekami nukleorūgščių ekstrahavimo ir gryninimo proceso, rinkinys be ekstrahavimo gali sugesti. pavyzdžiai.

Todėl rekomenduojama pasirinkti tyrimo rinkinį arba instrumentą, sukonfigūruotą su nukleorūgščių ekstrahavimo žingsniu.

2. Cheminis ekstrahavimas ar fizinis ultragarsinis fragmentacijos ekstrahavimas?
Paprastai tariant, cheminis ekstrahavimas gali būti taikomas didžiajai daliai išankstinio apdorojimo ir valymo.Tačiau storasienių gramteigiamų bakterijų ir kai kurių parazitų atveju cheminės ekstrakcijos metu nepavyksta gauti veiksmingų nukleino rūgščių šablonų, todėl aptikimas klaidingai neigiamas.Be to, cheminiam ekstrahavimui dažnai naudojamos stiprios priemonės, jei eliuavimas nėra kruopštus, į reakcijos sistemą lengva įvesti stiprų šarmą, todėl rezultatai būna netikslūs.

Ultragarsiniam suskaidymui naudojamas fizinis smulkinimas, kurį sėkmingai panaudojo GeneXpert, pirmaujanti įmonė žmonėms skirtų POCT srityje, ir turi absoliutų pranašumą išskiriant kai kuriuos sudėtingus mėginius (pvz., Mycobacterium tuberculosis) nukleorūgštis.

Todėl rekomenduojama pasirinkti tyrimo rinkinį arba instrumentą, sukonfigūruotą su nukleorūgščių ekstrahavimo pakopa.ir tai yra optimalu, jei yra ultragarso ištraukimo modulis.

3. Rankinis, pusiau automatinis ir visiškai automatinis?
Tai yra darbo sąnaudų ir darbo efektyvumo problema.Šiuo metu naminių gyvūnėlių ligoninės neturi pakankamai darbuotojų, nukleorūgščių gavyba ir aptikimas yra tam tikrų įgūdžių ir patirties reikalaujantis darbas.Nėra jokių abejonių, kad visiškai automatinis nukleorūgščių ekstrahavimo ir aptikimo aparatas yra puikus pasirinkimas.

4. Pastovios temperatūros stiprinimas ar kintamos temperatūros stiprinimas?
Amplifikacijos reakcija yra nukleorūgščių aptikimo grandis, o su šia grandimi susijusi profesionali technologija yra sudėtinga.Grubiai tariant, fermentai naudojami nukleino rūgščiai amplifikuoti.Stiprinimo procese aptinkamas sustiprintas fluorescencijos signalas arba įterptasis fluorescencijos signalas.Paprastai tariant, kuo anksčiau atsiranda fluorescencijos signalas, tuo didesnis mėginio tikslinio geno kiekis.

Pastovios temperatūros amplifikacija yra nukleorūgščių amplifikacija fiksuotoje temperatūroje, o kintamos temperatūros amplifikacija yra ciklinis stiprinimas griežtai pagal denatūravimą-atkaitinimą-pratęsimą.Buvo atliktas pastovios temperatūros stiprinimo laikas, o kintamos temperatūros stiprinimo laikui didelę įtaką turi prietaiso temperatūros kilimo ir kritimo greitis (šiuo metu daugelis gamintojų gali atlikti 40 stiprinimo ciklų maždaug per 30 minučių).

Jei laboratorinės sąlygos geros ir zonavimas griežtas, galima teigti, kad tikslumo skirtumas tarp šių dviejų nebus didelis.Tačiau kintamos temperatūros amplifikacija per santykinai trumpesnį laiką susintetins daugiau nukleorūgščių produktų.Laboratorijose, kuriose nėra griežto zonavimo ir profesionalaus mokymo personalo, nukleorūgščių aerozolio nutekėjimo rizika bus didesnė, o nutekėjus įvyksta klaidingas teigiamas rezultatas, kurį labai sunku pašalinti.

Be to, pastovios temperatūros amplifikacija taip pat yra labiau linkusi į nespecifinį amplifikaciją, kai mėginys yra sudėtingas (santykinė reakcijos temperatūra yra žemesnė, o kuo aukštesnė pratęsimo temperatūra, tuo geresnis pradmenų surišimo specifiškumas).

Kalbant apie dabartinę technologiją, kintamos temperatūros stiprinimas yra patikimesnis.

5. Kaip išvengti nukleorūgščių amplifikacijos produktų nutekėjimo rizikos?
Šiuo metu daugelis gamintojų kaip nukleorūgščių reakcijos vamzdelį renkasi liaukos tipo PGR vamzdelį, kuris yra sandarus trinties būdu, o temperatūros denatūracija kintamos temperatūros denatūruojant kintamos temperatūros PGR amplifikacijoje siekia 90 laipsnių.
Celsijaus.Pakartotinis plėtimosi šiluma ir susitraukimo su šalčiu procesas yra didelis iššūkis PGR vamzdelio sandarinimui, o liaukos tipo PGR vamzdelis gana lengvai sukelia nuotėkį.

Pageidautina reakciją atlikti su visiškai uždarytu rinkiniu / vamzdeliu, kad išvengtumėte reakcijos produkto nutekėjimo.Būtų puiku, jei būtų sukurtas visiškai sandarus rinkinys nukleorūgščių ekstrakcijai ir aptikimui.

Taigi naujasis visiškai automatinis „New Tech“ nukleorūgščių ekstrahavimo ir aptikimo aparatas turi aukščiau nurodytus penkis optimalius pasirinkimus.